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1.
简介：
膳食纤维是指碳水化合物及其相类似物质的总和，包括多糖、寡糖、木质素以及相关的植物物质。主要有纤维素、半纤维素、果胶及亲水胶体物质，如树胶、海藻多糖等组分；另外还包括植物细胞壁中所含有的木质素；不被人体消化酶所分解的物质，如抗性淀粉、抗性糊精、抗性低聚糖、改性纤维素、黏质、寡糖以及少量相关成分，如蜡纸、角质、软木脂等。
总膳食纤维检测试剂盒是根据AOAC991.43
，AOAC 985.29
，AACC32-07
和AACC 32-05
方法开发的，也适用于其它方法，如AACC Method 32-21
，AACC method32-06
。
2.
检测原理
脱脂（如大于10%
）干燥后的样品经热稳定a-
淀粉酶、蛋白酶和淀粉葡萄糖苷酶酶解消化，酶解液通过乙醇沉淀、过滤，乙醇和丙酮洗涤残渣后干燥、称重，得到总膳食纤维（TDF
）残渣；
酶解液通过直接过滤、热水洗涤残渣，干燥后称重，得到不溶性膳食纤维（IDF
）残渣；
滤液用乙醇沉淀，过滤、干燥、称重，得到可溶性膳食纤维（SDF
）残渣。
TDF
、IDF
和SDF
的残渣扣除蛋白质
、灰分和空白即得TDF、
IDF和SDF
含量。
该检测试剂盒的主要优势在于直接提供高纯度的酶，酶的活力是标准
化的，而标准化的a-淀粉酶的活力在测量抗性淀粉是公认的。
淀粉葡萄糖苷酶中基本没有纤维素酶，而其他常用的酶制剂中常含有这种污染
物，这将导致溶解和低估β-
葡聚糖。该试剂盒提供的酶都是稳定的液体，可以保存到试剂盒有效期，并且是直接应用液，不需要使用前再溶解。
3.
用途
适用于检测谷物、水果、蔬菜和加工食品
中的总膳食纤维（TDF）、不溶性
膳食纤维（IDF
）和可溶性膳食纤维（SDF
）的检测。
4.
提供试剂及材料
每一个盒中的提供的酶试剂足够进行200
个试验，如另外需要可单独订货：
Bottle 1
，1瓶：
热稳定a-
淀粉酶（20mL
，~ 3,000 U/mL
，Ceralpha method
；~ 10,000 U/mL on
soluble starch
。).
Bottle 2
，1瓶：
纯化的蛋白酶(20mL
，50 mg/mL; ~ 350 tyrosine Units/mL
。)
Bottle 3
，2瓶:
淀粉葡萄糖苷酶(20mL
，3300 U/mL on soluble starch
。)
总计：80ml
（4
瓶20ml
包装）
另外，实验中需要用到硅藻土：
酸洗硅藻土Celite?545，100g
或500g
包装，（货号：G-CEL100
，G-CEL500)
其他相关试剂盒：
膳食纤维质控试剂盒（货号：K-TSCK
）
质控试剂盒用于检验酶的效力和纯度，含下表中所列物质每种一瓶，并附有技术数据单(K-TSCK)
，盒中每种物质足够10
次测试用。
品种
数量
β-
葡聚糖（大麦）
1.0g
高直链玉米淀粉
10.0g
淀粉（小麦）
10.0g
酪蛋白
5.0g
果胶
1.0g
5.
需要的设备和试剂
5.1
设备
A.
高型无导流口烧杯：400mL
或600mL
B.
坩埚：具粗面烧结玻璃板，孔径40-60 μm
。清洗后在马福炉中525
℃灰化6
小时或过夜，用真空泵除去硅藻土和灰分，室温下用2%
清洗液浸泡1
小时，用水和蒸馏水冲洗干净，用15 mL
丙酮冲洗后风干，加1g
硅藻土到干燥的坩埚中，在130
℃干燥至恒重，在干燥器中冷却1
小时，记下坩埚（包括硅藻土）的重量。
C.
真空溶剂过滤装置：真空泵或有调节装置的抽吸器，1L
的抽滤瓶，侧壁有抽滤口，以及抽滤瓶配套的橡胶塞。用于酶解液的抽滤。
D.
恒温振荡水浴：95-100℃
E.
分析天平：感量0.1mg
F.
天平（台秤）：4 000g
量程，感量0.1g
G.
马福炉：525±5°C
，
H.
烘箱：103±2℃
，130±3℃
I.真空干燥箱
J.
干燥器：二氧化硅或等同干燥剂
K. PH
计，具有温度补偿功能。
L.
微量凯氏定氮仪。
M.
移液器，50-200 μL
，5 mL
，一次性移液吸头。
N.
计时器。
O.
橡胶刮勺
P.
磁力搅拌器
5.2
试剂
A. 95%
乙醇（体积比），
B. 78 %
乙醇：取821mL95%
乙醇置于容量瓶中，用水稀释到刻度，混匀。
C.
丙酮
D.
蒸馏水或去离子水
E.
清洗液Micro (International Products Corp.,Trenton,NJ).
，配成2%
液体
F. MES/TRIS
缓冲液（0.05mol/L
）:
称取19.52g(MES) (Sigma, M 8250)和14.2 g
(TRIS)(Sigma,T1503)西宝生物科技（上海）股份有限公司地址：上海市张江高科技园区毕昇路299弄11号502室 邮编：201204电话：021-60498804 吕小姐 手机：13636613774 QQ：1715451510
膳食纤维检测试剂盒是根据AOAC991.43，AOAC 985.29，AACC32-07和AACC 32-05方法开发的，也适用于其它方法，如AACC Method 32-21，AACC method32-06。2. 检测原理脱脂（如大于10%）干燥后的样品经热稳定a-淀FEN酶、蛋白酶和淀粉葡萄糖苷酶酶解消化，酶解液通过乙醇沉淀、过滤，乙醇和丙酮洗涤残渣后干燥、称重，得到总膳食纤维（TDF）残渣；酶解液通过直接过滤、热水洗涤残渣，干燥后称重，得到不溶性膳食纤维（IDF）残渣；滤液用乙醇沉淀，过滤、干燥、称重，得到可溶性膳食纤维（SDF）残渣。TDF、IDF和SDF的残渣扣除蛋白质、灰分和空白即得TDF、IDF和SDF含量。该 检测试剂盒的主要优势在于直接提供高纯度的酶，酶的活力是标准化的，而标准化的a-淀FEN酶的活力在测量抗性淀粉是公认的。杨树彦 13788987962 QQ：1961275959淀粉葡萄糖苷酶中基本没有纤维素酶，而其他常用的酶制剂中常含有这种污染物，这将导致溶解和低估β-葡聚糖。杨树彦 13788987962 QQ：1961275959该试剂盒提供的酶都是稳定的液体，可以保存到试剂盒有效期，并且是直接应用液，不需要使用前再溶解。3. 用途适用于检测谷物、水果、蔬菜和加工食品中的总膳食纤维（TDF）、不溶性膳食纤维（IDF）和可溶性膳食纤维（SDF）的检测。4. 提供试剂及材料每一个盒中的提供的酶试剂足够进行200个试验，如另外需要可单独订货：Bottle 1 ，1瓶：热稳定a-淀FEN酶（20mL，~ 3,000 U/mL，Ceralpha method；~ 10,000 U/mL onsoluble starch。).Bottle 2，1瓶：纯化的蛋白酶(20mL，50 mg/mL; ~ 350 tyrosine Units/mL。)Bottle 3，2瓶:淀粉葡萄糖苷酶(20mL，3300 U/mL on soluble starch。)总计：80ml（4瓶20ml包装）另外，实验中需要用到硅藻土：酸洗硅藻土Celite?545， 100g或500g包装，（货号：G-CEL100，G-CEL500)其他相关试剂盒：膳食纤维质控试剂盒（货号：K-TSCK）质控试剂盒用于检验酶的效力和纯度，含下表中所列物质每种一瓶，并附有技术数据单(K-TSCK)，盒中每种物质足够10次测试用。
品种
数量
β-葡聚糖（大麦）
1.0g
高直链玉米淀粉
10.0g
淀粉（小麦）
10.0g
酪蛋白
5.0g
果胶
1.0g
5. 需要的设备和试剂5.1 设备A. 高型无导流口烧杯：400mL或600mLB. 坩埚：具粗面烧结玻璃板，孔径40-60 μm。清洗后在马福炉中525℃灰化6小时或过夜，用真空泵除去硅藻土和灰分，室温下用2%清洗液浸泡1小时，用水和蒸馏水冲洗干净，用15 mL丙酮冲洗后风干，加1g硅藻土到干燥的坩埚中，在130℃干燥至恒重，在干燥器中冷却1小时，记下坩埚（包括硅藻土）的重量。C. 真空溶剂过滤装置：真空泵或有调节装置的抽吸器，1L的抽滤瓶，侧壁有抽滤口，以及抽滤瓶配套的橡胶塞。用于酶解液的抽滤。D. 恒温振荡水浴：95-100℃E. 分析天平：感量0.1mgF. 天平（台秤）：4 000g量程，感量0.1gG. 马福炉：525±5°C，H. 烘箱：103±2℃，130±3℃I. 真空干燥箱J. 干燥器：二氧化硅或等同干燥剂K. PH计，具有温度补偿功能。L. 微量凯氏定氮仪。M. 移液器，50-200 μL，5 mL，一次性移液吸头。N. 计时器。O. 橡胶刮勺P. 磁力搅拌器5.2 试剂A. 95%乙醇（体积比），B. 78 %乙醇：取821mL95%乙醇置于容量瓶中，用水稀释到刻度，混匀。C. 丙酮D. 蒸馏水或去离子水E. 清洗液Micro (International Products Corp.,Trenton,NJ).，配成2%液体F. MES/TRIS缓冲液（0.05mol/L）:称取19.52g (MES) (Sigma, M 8250)和14.2 g(TRIS) (Sigma,T1503)，用1.7L蒸馏水溶解，用6mol/L氢氧化钠调节PH至8.2±0.1，加水稀释到2L（注意24℃时PH值为8.2，20℃时PH值为8.3，27-28℃时PH值为8.1）G. 盐酸溶液（0.561 mol/L）：取93.5mL 6 mol/L的盐酸，加入700mL水中，混匀后用水定容到1L。H. 氢氧化钠I. PH值标准缓冲液：PH值为 4.0，7.0 和10.0。6. 酶的纯化和标准化6.1 根据AACC/AOAC的膳食纤维检测方法，必须确保酶的纯度。6.1.1 淀粉葡萄糖苷酶被木聚糖酶、纤维素酶和果胶酶污染，会低估β-葡聚糖、阿拉伯木聚糖和果胶的含量。6.1.2 热稳定a-淀粉酶被污染，会影响抗性淀粉的测量。6.1.3 蛋白酶被4-β-葡聚糖酶污染，会低估β-葡聚糖的含量。6.1.4 如不是使用该的酶，请参考下面方法测定