上海惠诚生物科技有限公司

【原理概述】 

本试剂盒基于一种常温恒温核酸快速扩增技术：在常温恒温下（一般为 39 ºC~42 ºC）， 在辅助蛋白和单链结合蛋白的帮助下，重组酶和引物形成复合体；进行同源搜索并结合目的同源域，此时在该同源位置形成D-loop 区并开始进行链交换；伴随着重组酶从复合体上解离，聚合酶也结合到引物的 3’末端，开始链的延伸。依赖nfo 酶的作用，加入根据模板设计的特异的分子探针，使用胶体金技术（三明治夹心法）可以对终结果进行检测。

【产品特点】 

本试剂盒具有灵敏度高、特异性强、反应时 间短（仅需 15 min）等优点，反应组分为干粉状态，操作简便，易于保存。 本试剂对设备要求低，金属浴、水浴锅等即 可进行反应操作，无需购买 PCR 扩增仪等 价格高昂的专属设备。

【引物设计】 

建议使用长度在30-35 bp 的引物，引物过短会影响扩增速度和检测灵敏度；下游引物的 5’端标记一个修饰基团（常用生物素）。引物设计避免形成二级结构而影响扩增；扩 增子长度建议在150-500 bp。

【胶体金探针设计】

在上下游引物中间，设计一段长度为46-52nt 与目的片段互补的序列；5’端修饰一个抗原 标记（典型 FAM）；在 5’端和 3’末端的中部 位置标记一个 dSpacer（四氢呋喃，THF）， 作为 nfo 的识别位点；3’末端标记一个修饰 基团，例如胺基、磷酸基团或 C3-Spacer 等。

【试剂盒储存】 

1．储存条件：储存温度 ≤ -20 °C 恒温环境， 避光保存，避免重压； 

2．产品有效期：14 个月； 

3．生产日期见外包装。

【注意事项】

1. 使用前请仔细阅读说明书，严格按照操 作步骤进行操作；

2. 样品处理应该严格按照生物安全规范操 作，在进行反应时请注意避免核酸污染，并设置空白对照；

3. 使用时请取出实验所需的MIRA 反应单元的数量，剩余分请置于存储条件下；